DMRT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424507

概要

Dmrt1 は、マウスの性腺における性決定および分化プログラムを制御する、DM DNA結合ドメインを有する保存性の高い転写因子 DMRT1 をコードする。DMRT1 は、セルトリ細胞のアイデンティティを促進し、生殖細胞の発生を協調させ、さらに FOXL2 駆動性ネットワークへの拮抗を含む卵巣経路の不適切な活性化を抑制することで、生後の精巣維持に必須である。その機能は、減数分裂、精原細胞分化、ならびに精細管上皮における体細胞—生殖細胞間シグナル伝達の転写制御およびクロマチンに基づく制御と統合されている。DMRT1 関連プログラムの破綻や制御異常は、性分化疾患、造精機能障害、性腺形成不全と関連しており、DMRT1 は生殖生物学の機構研究における重要な結節点となっている。

DMRT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるDmrt1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Dmrt1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Dmrt1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DMRT1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DMRT1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Dmrt1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DMRT1の機能に不可欠なDmrt1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Dmrt1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DMRT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびDMRT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Dmrt1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DMRT1 HDRプラスミド（m）および DMRT1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDmrt1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDmrt1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。