Particules Lentivirales d'Activation (h) DMBT1: sc-402615-LAC

DMBT1 (« deleted in malignant brain tumors 1 ») code une glycoprotéine sécrétée de type récepteur scavenger riche en cystéines, impliquée dans la différenciation épithéliale, la défense immunitaire innée et l’homéostasie de la barrière muqueuse. La protéine DMBT1 peut se lier à divers ligands microbiens et endogènes, favorisant l’agglutination, la reconnaissance de motifs et la modulation des signaux inflammatoires à la surface des tissus. Elle est associée à des processus tels que les interactions avec la matrice extracellulaire, la réparation tissulaire et la régulation de l’adhésion et de la polarité cellulaires, avec des effets dépendant du contexte sur les programmes de croissance épithéliale. Une expression altérée de DMBT1 ou une perturbation de son locus a été rapportée dans plusieurs cancers d’origine épithéliale et dans des affections inflammatoires, ce qui en fait un nœud utile pour étudier les interfaces hôte–microbe et les réponses épithéliales au stress.

Les particules d'activation lentivirales DMBT1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de DMBT1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales DMBT1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription DMBT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de DMBT1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif DMBT1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.