DLK1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420009-ACT

Delta-like non-canonical Notch ligand 1 (Dlk1/DLK1) é uma proteína transmembrana com imprinting, regulada durante o desenvolvimento, que pode ser processada proteoliticamente para uma forma solúvel e atua como moduladora da sinalização célula–célula. Em tecidos de camundongo, Dlk1 está intimamente ligada ao controle do comprometimento de linhagem e ao remodelamento tecidual em contextos mesenquimais e neuroendócrinos, influenciando programas de diferenciação adipogênica e osteogênica e contribuindo para a manutenção de células-tronco/progenitoras. DLK1 interage com saídas de sinalização relacionadas a Notch e associadas a MAPK/ERK, e é comumente estudada no contexto mais amplo da regulação de redes de genes com imprinting e de vias endócrinas do desenvolvimento. A expressão desregulada de Dlk1 tem sido associada a fenótipos alterados de crescimento e diferenciação e é frequentemente investigada em modelos de disfunção metabólica, fibrose e anormalidades do desenvolvimento.

DLK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Dlk1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DLK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Dlk1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Dlk1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DLK1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Dlk1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DLK1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DLK1 em células tumorais com expressão de Dlk1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.