DJ-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425380-ACT

Mouse Park7 codifica a DJ-1, uma proteína responsiva ao estado redox que sustenta a homeostase celular sob estresse oxidativo e mitocondrial. DJ-1 modula as defesas antioxidantes, regula a proteostase e processos relacionados à autofagia, e influencia programas transcricionais ligados ao metabolismo e à adaptação ao estresse. Em neurônios e células da glia, DJ-1 se integra a vias que governam o controle de qualidade mitocondrial e o tamponamento de espécies reativas de oxigênio, fazendo de Park7 um lócus amplamente utilizado para estudar mecanismos de resiliência ao estresse. Alterações na função de DJ-1 são frequentemente investigadas em modelos de neurodegeneração e de estresse inflamatório para entender como a sinalização redox impacta a sobrevivência celular e a vulnerabilidade.

DJ-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Park7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DJ-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Park7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Park7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DJ-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Park7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DJ-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DJ-1 em células tumorais com expressão de Park7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.