Diversin Plasmide Double Nickase (h): sc-405360-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Diversin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Diversin Double Nickase Plasmid (h) e il Diversin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ANKRD6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Diversin Antibody (G-9): sc-365390
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Diversin Plasmide Double Nickase (h) | sc-405360-NIC | 20 µg | $410.00 |
ANKRD6 codifica Diversin, una proteina di scaffolding contenente ripetizioni di anchirina che coordina la trasduzione del segnale e l’organizzazione del citoscheletro durante lo sviluppo e l’omeostasi tissutale. Diversin modula la segnalazione Wnt attraverso interazioni con componenti chiave della via, collegando gli output trascrizionali dipendenti da β-catenina con la segnalazione della polarità planare cellulare (PCP) e la successiva attività di JNK. Attraverso queste vie, ANKRD6 influenza programmi di polarità cellulare, migrazione e differenziamento che modellano la morfogenesi. Un controllo disregolato della via Wnt e della segnalazione della polarità è frequentemente implicato nella trasformazione oncogenica e in difetti congeniti di patterning, rendendo Diversin un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sul riassetto delle vie di segnalazione.
Diversin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ANKRD6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ANKRD6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ANKRD6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ANKRD6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.