DIS3L2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405372-ACT

O DIS3L2 humano codifica uma exorribonuclease citoplasmática 3′–5′ que participa da vigilância e da renovação (turnover) de RNA, com um papel destacado na degradação de substratos de RNA oligouridilados produzidos pelo acréscimo de caudas mediado por TUTases. Por meio da depuração seletiva de pré-miRNAs aberrantes e RNAs estruturados, o DIS3L2 influencia a biogênese de pequenos RNAs, a regulação gênica pós-transcricional e a homeostase celular sob estresse. A atividade do DIS3L2 se conecta a vias que controlam proliferação e diferenciação ao modular a estabilidade de transcritos e redes de controle de qualidade de RNA. Alterações na função do DIS3L2 têm sido associadas a fenótipos do desenvolvimento e relacionados a tumores, tornando-o um ponto de interesse para estudar como a degradação de RNA desregulada contribui para programas de expressão gênica relevantes em doenças.

DIS3L2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DIS3L2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DIS3L2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DIS3L2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DIS3L2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DIS3L2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DIS3L2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DIS3L2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DIS3L2 em células tumorais com expressão de DIS3L2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.