DIO2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402262

概要

DIO2はII型ヨードチロニン脱ヨウ素酵素（type II iodothyronine deiodinase）をコードしており、これは小胞体に局在するセレン含有酵素で、サイロキシン（T4）の外環脱ヨウ素化を触媒して活性型ホルモンであるトリヨードチロニン（T3）へと変換します。細胞内のT3利用可能量を制御することで、DIO2は甲状腺ホルモン受容体依存的な転写プログラムを形成し、組織状況に応じてエネルギー代謝、熱産生、脂質およびグルコース恒常性、分化などを調節します。DIO2活性は、セレノタンパク質合成や、酵素の安定性と分解（ターンオーバー）に影響する酸化ストレス応答を含む、レドックス制御およびセレン生物学とも統合的に関わっています。DIO2の発現や機能の変化は代謝表現型や甲状腺ホルモン応答性の病態生理と関連づけられており、内分泌調節、肥満関連メカニズム、ならびに組織特異的な甲状腺ホルモンシグナル伝達の研究対象として重要性が示されています。

DIO2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDIO2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DIO2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DIO2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DIO2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DIO2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DIO2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DIO2の機能に不可欠なDIO2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DIO2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DIO2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDIO2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DIO2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DIO2 HDRプラスミド（h）および DIO2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDIO2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDIO2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。