DinB Double Nickaseプラスミド (h): sc-405052-NIC

ヒトのPOLKは、DNAポリメラーゼκ（DinB）をコードしている。これはYファミリーに属する損傷乗り越え（TLS）DNAポリメラーゼであり、かさ高いDNA付加体など、通常なら複製型ポリメラーゼを停止させてしまう損傷を越えて複製を進めることを可能にする。POLKはDNA損傷耐性および複製フォーク進行の維持に関与し、増殖細胞核抗原（PCNA）と相互作用するとともに、ATRを介した複製ストレスシグナルによって制御される経路に参加する。損傷バイパス活性は変異スペクトラムやゲノム安定性に影響を及ぼし、POLKの機能異常は遺伝毒性ストレスに対する細胞応答の変化や異常な変異誘発と関連づけられる。そのためPOLKは、DNA修復ネットワークのバランス、複製ストレス生物学、ならびに体細胞変異の蓄積を形作る機構という観点から研究されている。

DinB ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における POLK 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、POLK内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、POLKの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、POLKが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。