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Dia 1双切口酶质粒(h) | sc-401929-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Dia 1双切口酶质粒(h2) | sc-401929-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DIAPH1 编码 formin 蛋白 Dia1,这是一种肌动蛋白成核与延长因子,在 RhoA 信号通路下游协调细胞骨架重塑。Dia1 促进线性 F-肌动蛋白组装、应力纤维形成以及微管稳定,从而影响细胞极性、黏附、胞质分裂和定向迁移。通过其在细胞骨架动态与力学信号转导中的作用,DIAPH1 有助于调控细胞分裂、组织结构等过程。DIAPH1 活性异常与人类疾病表型相关,包括感音神经性听力损失和血小板减少症;它也常用于研究肌动蛋白依赖的运动与增殖发生失调的情境。
Dia 1 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 DIAPH1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对DIAPH1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏DIAPH1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了DIAPH1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。