Dia 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401929

Visão geral

DIAPH1 (Dia1) codifica uma formina responsiva a RhoA que nucleia e alonga filamentos lineares de actina, coordenando a remodelação do citoesqueleto necessária para a forma celular, a adesão e a migração dirigida. A Dia1 interage com a sinalização de GTPases Rho e coopera com a profilina e outros reguladores de actina para sustentar a montagem de fibras de stress, a formação de filopódios e a citocinese. Por meio dos seus efeitos na comunicação cruzada entre actina e microtúbulos e no tráfego de membranas, a DIAPH1 contribui para processos como o posicionamento do fuso e a dinâmica de vesículas. A atividade desregulada de DIAPH1 tem sido associada a alterações na mecanotransdução e tem relevância em doenças como perda auditiva hereditária e fenótipos plaquetários/citoesqueléticos, tornando-a um alvo útil para estudos funcionais em sistemas celulares humanos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Dia 1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene DIAPH1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do DIAPH1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do DIAPH1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Dia 1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de DIAPH1 para a investigação da sinalização de Dia 1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) DIAPH1 críticos para a função Dia 1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos DIAPH1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Dia 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Dia 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus DIAPH1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Dia 1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Dia 1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia DIAPH1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo DIAPH1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.