DGAT1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-401735-LAC

DGAT1 (diacilglicerol O-aciltransferase 1) é uma enzima de membrana do retículo endoplasmático que catalisa a etapa terminal e comprometida da síntese de triacilgliceróis, ao acilar o diacilglicerol usando substratos acil-CoA. Atua na interface entre a biogênese de gotículas lipídicas, a absorção intestinal de lipídios e o armazenamento de energia celular, modulando a renovação (turnover) de triglicerídeos e os reservatórios de sinalização lipídica. A atividade de DGAT1 influencia o manejo de ácidos graxos e as respostas ao estresse lipotóxico, sendo frequentemente estudada na remodelação de vias metabólicas associadas à obesidade, resistência à insulina, doença hepática gordurosa não alcoólica e dislipidemia. Em biologia do câncer e pesquisa em inflamação, o armazenamento de lipídios neutros dependente de DGAT1 tem sido usado para investigar como as células amortecem o excesso de ácidos graxos e regulam a composição lipídica das membranas.

As Partículas de Ativação Lentivirais DGAT1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de DGAT1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais DGAT1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição DGAT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de DGAT1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo DGAT1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.