Desmin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400248

概要

DESはデスミンをコードしており、デスミンはIII型中間径フィラメントタンパク質の一種で、心筋・骨格筋・平滑筋細胞において不可欠な細胞骨格の足場（スキャフォールド）を形成します。デスミンはZディスク構造と統合し、筋原線維をミトコンドリア、核、ならびに筋細胞膜（サルコレマ）に連結することで、メカノトランスダクション、オルガネラの配置、収縮機能の完全性を支えます。また、筋細胞の安定性やリモデリングに影響する細胞骨格の組織化およびストレス応答過程にも関与します。DESの破綻は、タンパク質凝集と進行性の筋機能障害を特徴とするデスミン関連ミオパチーや心筋症と関連しており、プロテオスタシスや筋変性機構の研究において重要な標的です。

Desmin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDES遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DES内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DESのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Desminタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Desminシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DES欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Desminの機能に不可欠なDESエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DESゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Desmin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDesmin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DES遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Desmin HDRプラスミド（h）および Desmin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDESホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDES標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。