Desmin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400248-ACT

O gene humano **DES** codifica a desmina, uma proteína de filamento intermediário do tipo III que forma uma rede estrutural central em células musculares esqueléticas, cardíacas e lisas. Os filamentos de desmina integram as miofibrilas ao sarcolema, às mitocôndrias e ao núcleo para sustentar a estabilidade mecânica, a transmissão de força e o posicionamento de organelas durante a contração e as respostas ao estresse. Essa arquitetura do citoesqueleto interage com a organização do sarcômero, a mecanotransdução e vias de proteostase que mantêm a integridade muscular. A expressão desregulada de **DES** ou a montagem anormal de seus filamentos está associada a miopatias miofibrilares e cardiomiopatias, tornando a desmina um alvo-chave para estudar a degeneração muscular e o remodelamento celular induzido por estresse.

Desmin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DES sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Desmin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DES em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DES, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Desmin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DES nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Desmin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Desmin em células tumorais com expressão de DES silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.