Dermatopontin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402924

概要

DPTは、コラーゲンに結合し、マトリックスの組織化、細胞接着、ならびに細胞―マトリックス間シグナル伝達を調節する、チロシンに富む細胞外マトリックス（ECM）タンパク質であるデルマトポンチンをコードします。デルマトポンチンは、コラーゲン線維形成（フィブリロジェネシス）に影響を与えるとともに、TGF-β関連応答を含む増殖因子制御下の経路と連携して線維芽細胞の活性を形作ることで、細胞外マトリックスの組み立てやリモデリングに関与します。DPT発現の変化は、線維化リモデリング、創傷治癒のダイナミクス、ならびに複数の病的状況で観察されるストローマ変化と関連づけられてきました。ストローマのECM構成要素として、デルマトポンチンは、微小環境からのシグナルが細胞移動、メカノトランスダクション、組織構築をどのように制御するかを研究するうえでも重要です。

Dermatopontin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDPT遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DPT内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DPTのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Dermatopontinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Dermatopontinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DPT欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Dermatopontinの機能に不可欠なDPTエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DPTゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Dermatopontin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDermatopontin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DPT遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Dermatopontin HDRプラスミド（h）および Dermatopontin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDPTホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDPT標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。