Plasmide CRISPR/Cas9 KO Delta (h): sc-400790

Présentation

DLL1 code le ligand humain Delta-like 1 (Delta), un activateur des récepteurs Notch ancré à la membrane, qui assure une signalisation juxtacrine contrôlant les décisions de destinée cellulaire, l’organisation des tissus et le maintien des cellules souches/progénitrices. L’interaction DLL1–NOTCH déclenche la libération protéolytique du domaine intracellulaire de Notch et l’activation de programmes transcriptionnels via RBPJ/CSL, influençant la différenciation, la prolifération et l’apoptose. Cette voie s’articule avec les programmes du développement et les signaux du microenvironnement, et sa dérégulation est fréquemment étudiée dans des contextes tels que la biologie des tumeurs, la neurogenèse et le développement des cellules immunitaires. L’expression de DLL1 et la dynamique de sa signalisation sont également pertinentes pour les transitions épithélio-mésenchymateuses et la régulation de l’angiogenèse, via un équilibre coordonné ligand–récepteur au sein de la voie Notch.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Delta (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DLL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DLL1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DLL1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Delta.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DLL1 pour l'étude de la signalisation de Delta, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DLL1 essentiels à la fonction de Delta
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DLL1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Delta plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Delta plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DLL1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Delta plasmide HDR (h) et le Delta (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DLL1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DLL1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.