Delta Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400790-ACT

A DLL1 humana codifica o ligante canônico Delta-like 1 (Delta) da via Notch, um ligante ancorado à membrana que se liga a receptores NOTCH para desencadear a clivagem proteolítica e a liberação do domínio intracelular de Notch, regulando assim programas transcricionais que controlam decisões de destino celular. A sinalização Notch mediada por DLL1 é central para o padrão embrionário, a neurogênese, a somitogênese e a manutenção de compartimentos de células-tronco e progenitoras, por meio da modulação de diferenciação, proliferação e inibição lateral. Alterações na atividade do eixo DLL1/Notch têm sido associadas à desregulação da homeostase tecidual e a distúrbios do desenvolvimento, e são frequentemente estudadas em contextos de sinalização aberrante na biologia do câncer, na angiogênese e na diferenciação de células imunes. Como um nó de via na superfície celular, DLL1 oferece um ponto de acesso tratável para dissecar a dinâmica da sinalização justácrina e as respostas transcricionais a jusante.

Delta O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DLL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Delta O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DLL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DLL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Delta. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DLL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Delta no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Delta em células tumorais com expressão de DLL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.