Plasmide CRISPR/Cas9 KO Delta-3 (m): sc-420011

Présentation

Dll3 code Delta-3, un ligand atypique de Notch qui module la signalisation des récepteurs Notch au cours du développement embryonnaire, en particulier lors de la somitogenèse et de la mise en place de l’axe antéro-postérieur. Chez la souris, DLL3 agit principalement dans l’appareil de Golgi et le réticulum endoplasmique pour influencer la sortie de la voie Notch en affectant la maturation des récepteurs et les interactions avec les ligands, façonnant ainsi des programmes transcriptionnels qui gouvernent les décisions de destinée cellulaire. La perturbation de Dll3 dérègle la signalisation oscillatoire de Notch et la dynamique de l’horloge de segmentation, entraînant des défauts de patterning des vertèbres et des côtes et fournissant un modèle de malformations congénitales de la colonne vertébrale. Comme la signalisation Notch interfère aussi avec la différenciation, la prolifération et l’homéostasie tissulaire, les études de perte de fonction de Dll3 sont utiles pour disséquer les interactions entre voies de signalisation dans des contextes développementaux et pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Delta-3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Dll3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Dll3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Dll3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Delta-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Dll3 pour l'étude de la signalisation de Delta-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Dll3 essentiels à la fonction de Delta-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Dll3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Delta-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Delta-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Dll3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Delta-3 plasmide HDR (m) et le Delta-3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Dll3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Dll3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.