Delta-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420011-ACT

O gene Dll3 de camundongo codifica a Delta-3, um ligante atípico da família Notch que modula principalmente a sinalização dos receptores Notch durante o desenvolvimento embrionário e o padronização dos tecidos. A Delta-3 é enriquecida no mesoderma pré-somítico, onde contribui para o relógio de segmentação e para a formação das fronteiras dos somitos por meio da regulação da dinâmica da via Notch e da inibição lateral. Ao moldar decisões de destino celular e programas de diferenciação, Dll3 influencia linhagens neurogênicas e miogênicas e processos morfogenéticos mais amplos. A sinalização Notch associada ao DLL3, quando desregulada, tem sido relacionada a anomalias do desenvolvimento e é frequentemente utilizada como marcador de pesquisa na biologia de tumores neuroendócrinos, apoiando estudos mecanísticos do controle da via.

Delta-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Dll3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Delta-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Dll3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Dll3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Delta-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Dll3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Delta-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Delta-3 em células tumorais com expressão de Dll3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.