Delta-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402857-ACT

O DLL3 humano codifica a Delta-3, um ligante atípico do tipo Delta-like que modula a sinalização Notch durante o desenvolvimento embrionário, particularmente na somitogênese e na especificação de linhagens neuroendócrinas. Ao contrário dos ligantes canônicos de Notch, o DLL3 localiza-se predominantemente em compartimentos intracelulares, onde pode influenciar o tráfego receptor–ligante e ajustar finamente a saída da via Notch, afetando decisões de destino celular e programas de diferenciação. A expressão desregulada de DLL3 está fortemente associada à biologia de tumores neuroendócrinos e a redes transcricionais dependentes de Notch alteradas, tornando-o um marcador útil e um nó mecanístico para estudar a plasticidade de linhagem. Perturbações de via impulsionadas por DLL3 também são relevantes para modelos de padronização do desenvolvimento e para o controle transcricional de estados progenitores.

Delta-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DLL3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Delta-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DLL3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DLL3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Delta-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DLL3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Delta-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Delta-3 em células tumorais com expressão de DLL3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.