DEC1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402058-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- DEC1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- DEC1ダブルニカースプラスミド（h）およびDEC1ダブルニカースプラスミド（h2）は、BHLHE40を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: DEC1 抗体 (S-8): sc-101023
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
DEC1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402058-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DEC1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402058-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BHLHE40は、ベーシックヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）型転写因子であるDEC1（BHLHE40/STRA13としても知られる）をコードしており、低酸素および概日時計からの入力を統合する、状況依存的な遺伝子発現制御因子です。DEC1は、酸素感知や細胞ストレスの下流にある転写プログラムに関与し、コアクロック因子や低酸素応答ネットワークとの相互作用を介して、細胞周期の進行、分化、代謝適応に影響を及ぼします。増殖、アポトーシス、炎症シグナルに関わる標的遺伝子を調節することで、BHLHE40は腫瘍生物学の変化、免疫細胞機能、微小環境ストレスへの応答と関連付けられてきました。これらの特性により、DEC1はヒト細胞における低酸素―概日時計クロストークおよびストレス適応経路における転写制御を研究する上で有用な結節点となります。
DEC1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における BHLHE40 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、BHLHE40内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、BHLHE40の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、BHLHE40が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。