DDX36 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404744-ACT

DHX36 codifica a helicase humana de RNA/DNA DDX36, uma helicase do tipo DEAH-box que se liga preferencialmente a estruturas de G-quadruplex e as resolve tanto em RNA quanto em DNA. Ao desenrolar essas estruturas secundárias, a DDX36 ajuda a regular programas transcricionais e pós-transcricionais, incluindo a degradação de mRNA, a tradução e a manutenção da estabilidade do genoma. A proteína tem sido associada ao controle da proliferação celular e da expressão gênica responsiva ao estresse, processos frequentemente perturbados no câncer e em outras doenças nas quais a regulação mediada por G-quadruplex é alterada. A função da DDX36 também é relevante para vias que governam o metabolismo de RNA e a vigilância de ácidos nucleicos, que moldam a sinalização oncogênica e os estados de diferenciação celular.

DDX36 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DHX36 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DDX36 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DHX36 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DHX36, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DDX36. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DHX36 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DDX36 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DDX36 em células tumorais com expressão de DHX36 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.