DDX17 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401338-ACT

DDX17 (helicase 17 da família DEAD-box) é uma helicase de RNA humana dependente de ATP que remodela o RNA e complexos ribonucleoproteicos para coordenar múltiplas etapas do metabolismo de RNA. Participa do splicing do pré-mRNA, da correulação transcricional, da biogênese de microRNAs e do processamento de RNAs relacionados aos ribossomos, conectando a atividade de helicase de RNA a programas de expressão gênica que governam proliferação e diferenciação. A função de DDX17 cruza-se com redes transcricionais dependentes de sinalização e com complexos regulatórios associados à cromatina, moldando isoformas de transcritos específicas de contexto e a estabilidade do RNA. A desregulação do processamento de RNA e do controle transcricional associados a DDX17 tem sido implicada em vias oncogênicas e do desenvolvimento, tornando-a relevante para estudos mecanísticos de expressão gênica alterada em modelos de doença.

DDX17 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DDX17 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DDX17 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DDX17 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DDX17, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DDX17. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DDX17 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DDX17 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DDX17 em células tumorais com expressão de DDX17 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.