DDR2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400414-ACT

O receptor de domínio discoidina 2 (DDR2) é uma tirosina quinase receptora ativada por colágeno que medeia a sinalização célula–matriz, regulando adesão, migração, proliferação e remodelamento da matriz extracelular. Ao se ligar a colágenos fibrilares, o DDR2 desencadeia sinalização dependente de fosforilação por vias como MAPK/ERK, PI3K/AKT e quinases da família SRC, influenciando a dinâmica do citoesqueleto e programas transcricionais ligados ao remodelamento tecidual. A atividade do DDR2 está implicada em interações estroma–tumor e em processos fibróticos por seu papel na detecção de colágeno e na renovação da matriz, e alterações na sinalização de DDR2 têm sido associadas a mudanças no comportamento invasivo e em fenótipos mesenquimais. Essas propriedades tornam o DDR2 um alvo útil para estudar sinalização induzida por colágeno, transições do tipo EMT e a regulação do destino celular pelo microambiente.

DDR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DDR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DDR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DDR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DDR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DDR2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DDR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DDR2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DDR2 em células tumorais com expressão de DDR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.