DDIT3/GADD153/CHOP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419970

Visão geral

O gene Ddit3 de camundongo codifica a DDIT3 (também conhecida como GADD153/CHOP), um fator de transcrição bZIP induzível por estresse que forma heterodímeros com membros da família C/EBP para reprogramar a expressão gênica durante o estresse celular. Trata-se de um efetor central da resposta a proteínas mal dobradas (UPR) a jusante da sinalização PERK–eIF2α–ATF4 e integra o estresse do retículo endoplasmático com vias de estresse oxidativo, privação de nutrientes e dano ao DNA. A DDIT3 regula apoptose, autofagia e controle do ciclo celular, influenciando a integridade mitocondrial e programas transcricionais que determinam o destino celular. Alterações na atividade de DDIT3 têm sido implicadas em fenótipos inflamatórios e metabólicos e ela é amplamente utilizada como um marcador mecanístico em modelos de neurodegeneração, estresse de células β relacionado ao diabetes e adaptação ao estresse no microambiente tumoral.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO DDIT3/GADD153/CHOP (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ddit3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ddit3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ddit3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína DDIT3/GADD153/CHOP.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ddit3 para a investigação da sinalização de DDIT3/GADD153/CHOP, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ddit3 críticos para a função DDIT3/GADD153/CHOP
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ddit3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo DDIT3/GADD153/CHOP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo DDIT3/GADD153/CHOP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ddit3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo DDIT3/GADD153/CHOP Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR DDIT3/GADD153/CHOP (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ddit3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ddit3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.