DcR2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403389-ACT

TNFRSF10D codifica o receptor chamariz 2 (DcR2), um membro da superfamília de receptores de TNF que se liga ao TRAIL (TNFSF10), mas não possui um domínio de morte funcional, atenuando assim a sinalização apoptótica extrínseca. Ao competir com receptores de morte como DR4 (TNFRSF10A) e DR5 (TNFRSF10B), o DcR2 pode deslocar o resultado da via do TRAIL em direção a programas associados à sobrevivência, incluindo a sinalização de NF-κB e MAPK, influenciando a vigilância imune e as respostas ao estresse celular. Alterações na expressão de TNFRSF10D foram relatadas em múltiplos contextos de câncer e também estão ligadas à regulação da resistência à apoptose e a fenótipos associados à senescência, tornando-o relevante para estudos de biologia tumoral, inflamação e controle do destino celular.

DcR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNFRSF10D sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DcR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNFRSF10D em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNFRSF10D, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DcR2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNFRSF10D nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DcR2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DcR2 em células tumorais com expressão de TNFRSF10D silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.