DCC Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401035-ACT

DCC (deleted in colorectal carcinoma) codifica um receptor de netrina-1 e receptor de dependência que coordena o direcionamento axonal, a migração neuronal e a remodelação do citoesqueleto por meio de sinais na matriz extracelular. Além da neurobiologia do desenvolvimento, a sinalização de DCC interage com vias que controlam adesão celular, polaridade e apoptose, com efeitos downstream sobre a dinâmica das GTPases Rho e processos ligados a MAPK/PI3K. Alterações na expressão ou na função de DCC têm sido associadas à formação desorganizada de circuitos neurais e à biologia tumoral, em que mudanças na sinalização netrina–DCC podem influenciar a sinalização de sobrevivência, a invasão e comportamentos do tipo transição epitélio–mesênquima. Essas características tornam o DCC humano um alvo valioso para estudar a transdução de sinais de orientação, interações célula–célula e respostas apoptóticas dependentes do contexto.

DCC O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DCC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DCC O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DCC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DCC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DCC. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DCC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DCC no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DCC em células tumorais com expressão de DCC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.