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DC-STAMPCRISPR激活质粒(h) | sc-402527-ACT | 20 µg | $397.00 |
DCSTAMP 编码 DC-STAMP,这是一种多次跨膜蛋白,对细胞—细胞融合事件至关重要;该类融合可使单核细胞/巨噬细胞前体形成多核破骨细胞和异物巨细胞。DC-STAMP 整合由 RANKL 驱动的破骨细胞生成信号与炎症信号,以协调分化与融合过程,从而影响骨吸收以及免疫微环境的重塑。DC-STAMP 活性失调与破骨细胞功能异常相关,并已在炎症性骨丢失、自身免疫性炎症以及肿瘤相关破骨细胞生成等背景中得到研究。作为髓系谱系细胞融合与成熟的调控因子,DC-STAMP 可作为一个有用的切入点,用于解析巨噬细胞极化、多核化以及与骨免疫学相关的通路机制。
DC-STAMP CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性DCSTAMP的表达。
DC-STAMP CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的DCSTAMP基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于DCSTAMP转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性DC-STAMP表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的DCSTAMP位点,并能够研究内源性位点上依赖于DC-STAMP的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在DCSTAMP表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟DC-STAMP通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。