DC-SIGN Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-401368-LAC

CD209 codifica o DC-SIGN (dendritic cell-specific intercellular adhesion molecule-3-grabbing non-integrin), um recetor de lectina do tipo C expresso de forma proeminente em células dendríticas e em populações selecionadas de macrófagos, que reconhece glicanos ricos em manose e glicanos fucosilados. Por meio da ligação aos seus ligandos, o DC-SIGN influencia o reconhecimento de patógenos, a captação de antigénios, o tráfego endossomal e a formação da sinapse imunitária, ao mesmo tempo que se acopla a programas de sinalização que envolvem a modulação de NF-κB dependente de Raf-1 e respostas transcricionais mais amplas da imunidade inata. Este recetor participa em comunicação cruzada com vias dos recetores do tipo Toll e molda a produção de citocinas, podendo enviesar o “priming” e a polarização subsequentes de células T. A atividade e os padrões de expressão desregulados do DC-SIGN têm sido associados a alterações nas interações hospedeiro–patógeno e à remodelação do microambiente imunitário em modelos de doenças infecciosas e em contextos inflamatórios.

As Partículas de Ativação Lentivirais DC-SIGN (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de CD209 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais DC-SIGN (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição CD209, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de DC-SIGN. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo CD209 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.