DBR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407375

概要

DBR1はRNAラリアット脱分岐酵素1をコードしており、保存性の高いホスホジエステラーゼとして、イントロンのラリアット分岐点にある2′–5′ホスホジエステル結合を加水分解し、切り出されたイントロンを直鎖状にして分解（ターンオーバー）へ導きます。この活性によりDBR1は、スプライソソーム依存的なRNAプロセシング、イントロン分解経路、そして遺伝子発現プログラムに影響し得るRNA恒常性の維持と関連づけられます。ラリアット脱分岐が攪乱されると、環状RNAと直鎖RNAの比率バランスが変化し、ストレス応答や分化の状況下における転写後制御が再編され得ます。そのため、DBR1の機能不全は文献上、神経系の表現型やウイルス感受性の表現型と関連づけられており、疾患関連の細胞種におけるRNA代謝の作用機序研究においてDBR1が重要であることを支持しています。

DBR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDBR1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DBR1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DBR1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DBR1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DBR1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DBR1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DBR1の機能に不可欠なDBR1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DBR1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DBR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDBR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DBR1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DBR1 HDRプラスミド（h）および DBR1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDBR1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDBR1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。