DAX-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402180-ACT

NR0B1 codifica o DAX-1, um receptor nuclear órfão que atua principalmente como correagulador transcricional em tecidos esteroidogênicos, integrando a sinalização de receptores nucleares a programas de desenvolvimento. O DAX-1 modula genes envolvidos na diferenciação adrenal e gonadal e na biossíntese de hormônios esteroides, incluindo a regulação de redes transcricionais dependentes do fator esteroidogênico 1 (NR5A1/SF-1). Por meio de seus efeitos na determinação do destino celular e na homeostase endócrina, o DAX-1 ajuda a controlar a proliferação e a diferenciação no córtex adrenal e em linhagens reprodutivas. A desregulação de NR0B1 está associada à hipoplasia adrenal congênita ligada ao X e ao hipogonadismo hipogonadotrófico, tornando-o um alvo relevante para estudos mecanísticos do desenvolvimento endócrino e da regulação transcricional.

DAX-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NR0B1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DAX-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NR0B1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NR0B1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DAX-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NR0B1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DAX-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DAX-1 em células tumorais com expressão de NR0B1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.