DAT/Dopamine Transporter/SLC6A3CRISPR激活质粒(h): sc-400391-ACT

SLC6A3 编码多巴胺转运体（DAT）。DAT 是一种位于突触前质膜的同向转运蛋白，通过 Na⁺/Cl⁻ 依赖性的再摄取将多巴胺从突触间隙清除，从而塑造多巴胺能张力与信号持续时间。DAT 在黑质-纹状体通路以及中脑-皮层-边缘系统环路中调控囊泡循环与多巴胺稳态，进而影响奖赏加工、运动能力和执行功能。SLC6A3 表达或转运体活性发生改变，与多巴胺能神经递质传递失调相关；在神经精神与神经退行性疾病研究背景下，这种失调被认为与注意相关表型、物质使用生物学以及帕金森样通路易损性有关。DAT 还与依赖激酶的转运与磷酸化调控程序相互作用，这些程序控制其膜定位与摄取能力。

DAT/Dopamine Transporter/SLC6A3 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SLC6A3的表达。

DAT/Dopamine Transporter/SLC6A3 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的SLC6A3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于SLC6A3转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性DAT/Dopamine Transporter/SLC6A3表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的SLC6A3位点，并能够研究内源性位点上依赖于DAT/Dopamine Transporter/SLC6A3的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SLC6A3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟DAT/Dopamine Transporter/SLC6A3通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。