DANGER CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407681-ACT

ITPRIP は DANGER（ITPRIP）をコードしており、神経細胞で発現が豊富な調節因子である。これはイノシトール 1,4,5-三リン酸受容体（IP3R）シグナル伝達に関連し、小胞体（ER）からのカルシウム放出に結びつく細胞内 Ca2+ 動態に影響を与えうる。DANGER は、ストレス応答性経路やアポトーシス関連シグナルの調節に関与すると報告されており、カスパーゼ制御に関連する相互作用などを介して、興奮毒性あるいはプロテオトキシックな条件下での細胞の生存／死の意思決定に影響する。カルシウム依存性のシグナルネットワークとの結合を通じて、DANGER はシナプス機能、ミトコンドリアのストレス応答、ならびに下流の転写プログラムの研究において重要である。カルシウム恒常性の破綻や DANGER 関連シグナルの変調は、神経変性や神経細胞傷害モデルに関係する機序に関与すると示唆されている。

DANGER CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ITPRIPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DANGER CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ITPRIP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はITPRIP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DANGERの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のITPRIP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDANGER依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびITPRIP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDANGER経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。