DACH1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404712

概要

DACH1（dachshund family transcription factor 1）は、核内でDNAに結合して機能する制御因子であり、細胞運命の決定や組織分化プログラムに関与し、発生シグナル伝達において重要な役割を担います。ヒト細胞では、DACH1は増殖制御、上皮系統の維持、細胞遊走に関連する転写ネットワークを調節し、ホルモン受容体シグナルや他の転写因子回路とのクロストークも含まれます。DACH1の発現や調節活性の変化は、腫瘍抑制的な表現型の変化と関連づけられており、細胞周期進行、浸潤、転移関連遺伝子の発現などの過程に影響を及ぼします。このように状況依存的に機能が変わることから、DACH1は、転写抑制／活性化のバランスや、疾患関連モデルにおける経路の組み替え（リワイヤリング）を研究するうえで有用な結節点となります。

DACH1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDACH1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DACH1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DACH1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DACH1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DACH1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DACH1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DACH1の機能に不可欠なDACH1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DACH1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DACH1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDACH1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DACH1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DACH1 HDRプラスミド（h）および DACH1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDACH1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDACH1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。