D1DR/Dopamine Receptor D1CRISPR激活质粒(h): sc-400532-ACT

DRD1 编码多巴胺 D1 受体（D1DR），这是一种 G 蛋白偶联受体（GPCR），主要与 Gαs/olf 偶联，从而刺激腺苷酸环化酶，提高细胞内 cAMP 水平，并激活依赖 PKA 的信号级联。在神经元中，D1DR 信号通过包括 CREB 和 DARPP-32 在内的下游效应分子，调控膜兴奋性、突触可塑性以及基因表达程序，将多巴胺能张力与环路层面的功能整合起来。DRD1 参与多巴胺介导的通路，这些通路塑造奖赏、动机与运动控制；在神经精神疾病和运动障碍的研究中，受体表达或信号动力学的改变也常被重点考察。作为一种表达受到严格调控的膜受体，DRD1 也是研究 GPCR 去敏化、受体转运以及与其他神经调制系统串话的有用靶标。

D1DR/Dopamine Receptor D1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性DRD1的表达。

D1DR/Dopamine Receptor D1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的DRD1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于DRD1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性D1DR/Dopamine Receptor D1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的DRD1位点，并能够研究内源性位点上依赖于D1DR/Dopamine Receptor D1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在DRD1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟D1DR/Dopamine Receptor D1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。