Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Cytokeratin 8 Double Nickaseプラスミド (h): sc-418254-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Cytokeratin 8 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Cytokeratin 8ダブルニカースプラスミド（h）およびCytokeratin 8ダブルニカースプラスミド（h2）は、KRT8を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Cytokeratin 8 抗体 (C51): sc-8020
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Cytokeratin 8 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-418254-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cytokeratin 8 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-418254-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRT8 はサイトケラチン8をコードしており、サイトケラチン8は II 型の中間径フィラメントタンパク質です。主に KRT18 とヘテロポリマーを形成して、単層上皮細胞における中核的な細胞骨格ネットワークを構築します。サイトケラチン8は細胞構造の維持、機械的強度（耐性）、および細胞内小器官の配置を支えるとともに、リン酸化依存的なフィラメント再構築を介して、細胞極性、有糸分裂の進行、アポトーシスシグナル伝達、ストレス応答などの過程にも関与します。KRT8 の発現量やフィラメント構造の変化は上皮の完全性の破綻と関連づけられており、上皮性腫瘍の生物学、浸潤、転移関連の表現型との文脈で頻繁に研究されています。一般的な上皮マーカーとして、サイトケラチン8は発生や組織恒常性のモデル系において、系譜状態や分化プログラムの定義にも役立ちます。
Cytokeratin 8 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KRT8 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KRT8内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KRT8の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KRT8が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。