Cytokeratin 6A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401650

Visão geral

KRT6A codifica a citoqueratina 6A, uma proteína de filamento intermediário do tipo II que forma heterodímeros com queratinas do tipo I para constituir o citoesqueleto de queratina em epitélios estratificados. A citoqueratina 6A sustenta a resistência mecânica, coordena a remodelação do citoesqueleto durante a reparação de feridas e interage com a organização das junções celulares e com programas de resposta ao stress que moldam a diferenciação epitelial. A sua expressão é frequentemente induzida em queratinócitos hiperproliferativos, ligando o KRT6A a vias que regulam a regeneração epitelial e a manutenção da barreira. A desregulação da queratina 6A está implicada em doenças de queratinização hereditárias e adquiridas e é observada com frequência em contextos de tumores epiteliais, o que a torna relevante para estudos de plasticidade epitelial e de alterações do citoesqueleto associadas à doença.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Cytokeratin 6A (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene KRT6A em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do KRT6A, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do KRT6A na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Cytokeratin 6A.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de KRT6A para a investigação da sinalização de Cytokeratin 6A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) KRT6A críticos para a função Cytokeratin 6A
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos KRT6A para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Cytokeratin 6A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Cytokeratin 6A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus KRT6A. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Cytokeratin 6A Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Cytokeratin 6A (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia KRT6A para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo KRT6A definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.