Cytokeratin 19 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-421344-NIC

O gene Krt19 de camundongo codifica a citoqueratina 19 (K19), um filamento intermediário do tipo I que forma heteropolímeros obrigatórios com queratinas do tipo II para sustentar a arquitetura do citoesqueleto epitelial e a resistência mecânica. A K19 contribui para o controle da forma celular, a dinâmica de adesão e os programas de diferenciação epitelial, e sua rede de filamentos se conecta a nós de sinalização que regulam respostas ao estresse, polaridade e remodelamento do citoesqueleto. Como marcador enriquecido em epitélios simples e em certos estados epiteliais com características de progenitor, a K19 é frequentemente usada para estratificar subtipos epiteliais e para monitorar transições como remodelamento e comprometimento de linhagem. A expressão desregulada de K19 e a organização anormal de seus filamentos estão associadas a alterações na integridade epitelial e são amplamente estudadas em contextos de lesão tecidual, inflamação e transformação oncogênica em modelos murinos.

Cytokeratin 19 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Krt19 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Krt19. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Krt19. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Krt19 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.