Cytokeratin 18 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400305-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Cytokeratin 18O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Cytokeratin 18 (h) e o Plasmídeo Double Nickase Cytokeratin 18 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para KRT18. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Cytokeratin 18 Anticorpo (RGE53): sc-32329
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Cytokeratin 18 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400305-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cytokeratin 18 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400305-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRT18 codifica a citoqueratina 18, uma proteína de filamento intermédio do tipo I que heteropolimeriza com a queratina 8 para formar a rede citosquelética central das células epiteliais simples. A citoqueratina 18 contribui para a estabilidade mecânica celular, o posicionamento de organelos e a polaridade epitelial, sendo remodelada dinamicamente durante a mitose e em respostas ao stress por meio de reorganização dos filamentos dependente de fosforilação. Participa em alterações do citoesqueleto associadas à apoptose, incluindo clivagem mediada por caspases, que pode influenciar a integridade e a sinalização das células epiteliais. Alterações na expressão de KRT18, na organização dos filamentos ou nos padrões de clivagem têm sido associadas a lesão epitelial e a uma variedade de estados patológicos, tornando-a um marcador comum e um ponto mecanístico relevante em estudos de homeostase epitelial e stress.
Cytokeratin 18 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus KRT18 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de KRT18. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função KRT18. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com KRT18 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.