Cytokeratin 16 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403138-ACT

O KRT16 codifica a citoqueratina 16, uma proteína de filamento intermediário do tipo I que forma heterodímeros com membros da família da queratina 6 para reforçar a rede do citoesqueleto em epitélios estratificados. É rapidamente induzida durante a reparação de feridas, o stress mecânico e a sinalização inflamatória, apoiando a proliferação e migração de queratinócitos, bem como a remodelação da barreira. A citoqueratina 16 participa na organização dos filamentos de queratina e em programas de diferenciação epitelial que se articulam com vias de resposta ao stress e com a dinâmica do citoesqueleto. A expressão desregulada de KRT16 está associada a estados cutâneos hiperproliferativos e a perturbações da queratinização, tornando-a um marcador útil e um nó funcional para estudar a homeostase epidérmica e as respostas epiteliais ao stress.

Cytokeratin 16 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KRT16 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cytokeratin 16 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KRT16 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KRT16, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cytokeratin 16. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KRT16 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cytokeratin 16 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cytokeratin 16 em células tumorais com expressão de KRT16 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.