cytoglobin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402949-ACT

ヒトCYGBはサイトグロビン（cytoglobin）をコードしており、ヘムに結合するグロビンファミリーのタンパク質として、細胞内の酸素ハンドリングおよびレドックス恒常性の維持に寄与します。CYGBは、一酸化窒素（NO）代謝の調節、活性酸素種（ROS）の抑制、ならびに低酸素および酸化ストレス下での細胞生存プログラムの支援に関与するとされています。これらの作用は、HIFシグナル伝達やストレス応答性の転写ネットワークと交差する経路を介して発揮されると考えられています。CYGBの発現は複数の組織・細胞種で報告されており、線維芽細胞の活性化、血管生物学、代謝ストレスへの細胞適応などにおいて、状況依存的な役割を担う可能性があります。CYGB活性や発現の破綻は、炎症・線維化に関連する表現型と関連づけられており、また酸素・レドックスバランスが増殖、浸潤、治療応答機構に影響することから、腫瘍学領域でも研究されています。

cytoglobin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CYGBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

cytoglobin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CYGB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCYGB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性cytoglobinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCYGB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるcytoglobin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCYGB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるcytoglobin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。