Cystinosin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-429900

概要

Ctns は、リソソーム膜に局在する H⁺駆動性のシスチントランスポーターであるシスチノシンをコードしており、リソソーム腔内から細胞質へシスチンを排出することで、リソソーム輸送を細胞のレドックスバランスおよびアミノ酸恒常性と結び付けています。シスチノシン活性が失われるとリソソーム機能が乱れ、シスチンの蓄積が促進されるとともに、オートファジー–リソソーム動態、酸化ストレス応答、代謝適応に関わる経路が変化します。マウス系では、Ctns の破壊はシスチン蓄積表現型の根底にある機構をモデル化し、リソソーム輸送欠損が細胞ストレスシグナル伝達をどのように再編するかを検討するために広く用いられています。これらの過程は、リソソームを中心とした輸送・分解ネットワークが、腎臓、眼、免疫関連の細胞種における組織恒常性にどのように影響するかを理解するうえで重要です。

Cystinosin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCtns遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ctns内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ctnsのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Cystinosinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Cystinosinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ctns欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Cystinosinの機能に不可欠なCtnsエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ctnsゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Cystinosin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCystinosin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ctns遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Cystinosin HDRプラスミド（m）および Cystinosin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCtnsホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCtns標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。