cystatin D Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-405049-NIC

CST5 codifica a cistatina D, uma cistatina tipo 2 secretada que inibe proteases cisteínicas lisossomais e extracelulares, como as catepsinas, ajudando assim a regular a proteólise, o processamento de antígenos e a homeostase da barreira epitelial. Ao modular a atividade das catepsinas, a cistatina D pode influenciar a renovação da matriz extracelular e vias de sinalização dependentes de proteases relevantes para a remodelação tecidual e respostas inflamatórias. A alteração da expressão de CST5 ou um desequilíbrio entre proteases e inibidores tem sido associada a mudanças no comportamento do microambiente tumoral, à proteólise relacionada à invasão e à fisiopatologia das mucosas, apoiando seu uso como um nó mecanístico em estudos de proteostase e biologia epitelial. Assim, CST5 é um alvo útil para dissecar como o controle das catepsinas molda a diferenciação celular, as respostas ao estresse e a comunicação intercelular em sistemas modelo humanos.

cystatin D O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CST5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CST5. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CST5. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CST5 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.