cystatin C CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402420-ACT

CST3はシスタチンCをコードしており、シスタチンCは分泌型のシステインプロテアーゼ阻害因子として、カテプシンをはじめとするリソソーム／エンドソーム系のプロテアーゼ活性を抑制します。これにより、細胞外マトリックスのターンオーバー、抗原プロセシング、ならびにプロテオスタシス（タンパク質恒常性）の維持に寄与します。エンドリソソーム系および細胞周辺（ペリセルラー）空間におけるプロテアーゼ活性を調節することで、シスタチンCは炎症シグナル伝達、細胞移動、組織リモデリングにも影響を及ぼします。CST3の発現変化やシスタチンC量の変動は、神経変性過程、脳血管病理、腎・心血管系の生物学と関連づけられており、組織横断的にプロテアーゼ—阻害因子バランスを研究するうえで有用な結節点（ノード）となります。細胞モデルでは、CST3を操作することで、リソソーム機能、酸化ストレス応答、自然免疫活性化を結ぶ経路の解析に利用できます。

cystatin C CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CST3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

cystatin C CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CST3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCST3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性cystatin Cの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCST3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるcystatin C依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCST3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるcystatin C経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。