CysLT₁ Receptor CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416516-ACT

CYSLTR1 はヒトのシステイニルロイコトリエン受容体 1（CysLT1 受容体）をコードする遺伝子であり、LTC4、LTD4、LTE4 に結合して炎症性脂質メディエーターのシグナルを伝達する G タンパク質共役型受容体（GPCR）である。活性化されると主に Gq/11 と共役し、ホスホリパーゼ C シグナル伝達、細胞内 Ca2+ 動員、ならびに MAPK および NF-κB に連動した転写プログラムを誘導して、走化性、血管透過性、平滑筋収縮性を制御する。CYSLTR1 の活性はアラキドン酸／ロイコトリエン生合成経路と交差し、炎症組織における白血球と間質細胞のコミュニケーション形成に影響を与える。CysLT1 受容体シグナルの制御破綻は、気道の炎症とリモデリング、アレルギー反応、さらに広範な免疫介在性病態と関連づけられており、炎症研究における機序解明の重要な結節点としての利用を支持している。

CysLT1 Receptor CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CYSLTR1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CysLT1 Receptor CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CYSLTR1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCYSLTR1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CysLT1 Receptorの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCYSLTR1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCysLT1 Receptor依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCYSLTR1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCysLT1 Receptor経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。