Cyr61/CCN1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400366-ACT

CYR61 codifica Cyr61/CCN1, uma proteína matricelular secretada e associada à matriz extracelular, que modula as interações célula–matriz ao se ligar a integrinas e a proteoglicanos de heparan sulfato. Cyr61/CCN1 influencia a adesão, a migração, a proliferação e a sobrevivência celular, e integra a sinalização em programas angiogênicos e inflamatórios, incluindo adesão focal, MAPK/ERK, PI3K–AKT e a mecanotransdução YAP/TAZ. Como um gene de resposta imediata (immediate-early), CYR61 é rapidamente induzido por fatores de crescimento e por estresse tecidual e ajuda a moldar o reparo de feridas e a remodelação vascular. A expressão desregulada de CYR61 tem sido associada à fibrose, à neovascularização aberrante e à biologia do microambiente tumoral, sustentando seu uso como um nó mecanístico em pesquisas sobre câncer, doenças cardiovasculares e inflamatórias.

Cyr61/CCN1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CYR61 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cyr61/CCN1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CYR61 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CYR61, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cyr61/CCN1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CYR61 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cyr61/CCN1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cyr61/CCN1 em células tumorais com expressão de CYR61 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.