CyPB Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401888-ACT

O PPIB codifica a ciclofilina B (CyPB), uma isomerase peptidil-prolil cis-trans localizada no retículo endoplasmático, que acelera o dobramento de proteínas e sustenta a proteostase da via secretória. A CyPB participa do controlo de qualidade do RE e de respostas ao stress, incluindo a coordenação de redes de chaperonas e a modulação de processos dependentes de cálcio que influenciam a homeostase celular. Através da sua atividade isomerásica e das interações com substratos de dobramento, o PPIB liga a maturação proteica a vias que regulam a produção da matriz extracelular, a sinalização inflamatória e decisões de sobrevivência celular. A atividade ou expressão desregulada de PPIB/CyPB tem sido associada a contextos patológicos que envolvem processamento proteico aberrante, ativação imunitária e remodelação tecidular, tornando-o relevante para estudos mecanísticos em modelos de doença.

CyPB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PPIB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CyPB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PPIB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PPIB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CyPB. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PPIB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CyPB no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CyPB em células tumorais com expressão de PPIB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.