CYP51A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419931

Übersicht

Das murine Gen **Cyp51** kodiert das Cytochrom-P450-Enzym **CYP51A1** (Lanosterol-14α-Demethylase), eine konservierte Monooxygenase, die einen Schlüsselschritt im postsqualenen Mevalonat-/Sterol-Biosyntheseweg katalysiert, der zu Cholesterin und anderen Sterolen führt. Durch die Steuerung des Flusses von Sterol-Zwischenprodukten beeinflusst CYP51A1 die Membranzusammensetzung, lipid-raft-abhängige Signalübertragung und die Verfügbarkeit sterolabgeleiteter Metaboliten, die die zelluläre Homöostase modulieren. Störungen der Sterolbiosynthese sind mit veränderter Proliferation, Differenzierung und Stressantworten verknüpft, wodurch **Cyp51** ein geeigneter Knotenpunkt für die Untersuchung metabolischer Umprogrammierung und organspezifischer Lipidanforderungen ist. In Mausmodellen ermöglicht die Manipulation von **Cyp51** mechanistische Untersuchungen zur Regulation des Cholesterinwegs und zu dessen Beitrag zu Entwicklungs- und Stoffwechselphänotypen.

Das CYP51A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cyp51-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cyp51-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cyp51 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CYP51A1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cyp51-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CYP51A1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cyp51-Exone abzielen, die für die CYP51A1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cyp51-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CYP51A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CYP51A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cyp51-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CYP51A1 HDR-Plasmid (m) und CYP51A1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cyp51-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cyp51-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.