CYP51A1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419931
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- CYP51A1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico CYP51A1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
CYP51A1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419931 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O gene **Cyp51** de camundongo codifica a enzima do citocromo P450 **CYP51A1** (14α-desmetilase do lanosterol), uma mono-oxigenase conservada que catalisa uma etapa-chave na via de biossíntese do mevalonato/esteróis pós-esqualeno, levando ao colesterol e a outros esteróis. Ao controlar o fluxo de intermediários de esteróis, a CYP51A1 influencia a composição de membrana, a sinalização dependente de balsas lipídicas (lipid rafts) e a disponibilidade de metabólitos derivados de esteróis que modulam a homeostase celular. A perturbação da biossíntese de esteróis está associada a alterações na proliferação, diferenciação e respostas ao estresse, tornando **Cyp51** um ponto útil para estudar reprogramação metabólica e necessidades lipídicas específicas de órgãos. Em modelos murinos, a manipulação de **Cyp51** permite a investigação mecanística da regulação da via do colesterol e de sua contribuição para fenótipos de desenvolvimento e metabólicos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CYP51A1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Cyp51 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Cyp51, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Cyp51 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CYP51A1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Cyp51 para a investigação da sinalização de CYP51A1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Cyp51 críticos para a função CYP51A1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Cyp51 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo CYP51A1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo CYP51A1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Cyp51. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo CYP51A1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR CYP51A1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Cyp51 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Cyp51 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.