CYP4X1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-429886-ACT

O gene **Cyp4x1** de camundongo codifica a **CYP4X1**, uma monooxigenase do citocromo P450 implicada no metabolismo oxidativo de ácidos graxos e de outros substratos derivados de lipídios. Como parte da família **CYP4**, a CYP4X1 está ligada a vias que regulam a homeostase de mediadores lipídicos, o equilíbrio redox e a remodelação de lipídios de membrana — processos que podem influenciar a sinalização inflamatória e a fisiologia vascular ou neural. Alterações na atividade do citocromo P450 são frequentemente associadas a mudanças nas respostas ao estresse oxidativo e na produção de lipídios bioativos, tornando **Cyp4x1** um alvo útil para estudos mecanísticos de regulação metabólica. Em modelos murinos, a modulação da função da CYP4X1 pode apoiar pesquisas sobre como vias de oxidação lipídica moldam a fisiologia específica de tecidos e fenótipos relevantes para doenças, sem implicar desfechos clínicos.

CYP4X1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cyp4x1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CYP4X1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cyp4x1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cyp4x1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CYP4X1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cyp4x1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CYP4X1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CYP4X1 em células tumorais com expressão de Cyp4x1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.