CYP2R1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404463-ACT

O CYP2R1 humano codifica uma monooxigenase microssomal do citocromo P450 que atua como a principal 25-hidroxilase no metabolismo da vitamina D, convertendo colecalciferol e ergocalciferol em 25-hidroxivitamina D no retículo endoplasmático. Esta etapa enzimática é central nas vias de oxidação de esteroides e lipídios e contribui para a regulação sistêmica da homeostase cálcio-fosfato por meio da sinalização endócrina da vitamina D a jusante. Variações ou redução da atividade de CYP2R1 têm sido associadas a baixos níveis circulantes de 25-hidroxivitamina D e a fenótipos relacionados que afetam o metabolismo ósseo e mineral. Assim, o CYP2R1 é relevante para estudos mecanísticos de biotransformação hepática da vitamina D, biologia redox do citocromo P450 e redes de sinalização nutriente-hormônio.

CYP2R1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CYP2R1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CYP2R1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CYP2R1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CYP2R1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CYP2R1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CYP2R1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CYP2R1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CYP2R1 em células tumorais com expressão de CYP2R1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.