CYP27B1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401155-ACT

CYP27B1 codifica a 25-hidroxivitamina D 1α-hidroxilase mitocondrial, uma enzima do citocromo P450 que catalisa a conversão de 25-hidroxivitamina D no hormônio ativo 1,25-di-hidroxivitamina D3. Ao controlar a produção local e sistêmica de calcitriol, o CYP27B1 regula programas de sinalização do receptor de vitamina D associados à homeostase de cálcio e fosfato, à diferenciação epitelial e à modulação imunológica. A atividade de CYP27B1 integra vias metabólicas endócrinas e parácrinas, incluindo a ativação renal e extra-renal da vitamina D, e está acoplada a parceiros redox mitocondriais no metabolismo de esteroides/vitamina D. A desregulação ou variantes de perda de função em CYP27B1 estão associadas à ativação prejudicada da vitamina D e a doenças hereditárias do metabolismo mineral, oferecendo um ponto de entrada mecanístico para estudar redes transcricionais dependentes de vitamina D em modelos celulares humanos.

CYP27B1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CYP27B1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CYP27B1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CYP27B1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CYP27B1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CYP27B1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CYP27B1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CYP27B1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CYP27B1 em células tumorais com expressão de CYP27B1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.